李昆珊^1,2，吴璐一²，朱璐^1,2，王文佳¹，陈奕奕¹，马喆^1,2，张光涛³，顾沐恩¹，张含潇¹，吴焕淦^1,2

¹上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院，上海，中国；²上海市针灸经络研究所，上海，中国；³上海中医药大学附属第七人民医院，上海，中国

目的：肿瘤血管生成对肿瘤生长至关重要。我们的前期研究表明，隔药灸（HPM）可以延缓结肠炎相关性结肠癌（CAC）的发生，但关于其对血管生成影响的机制尚未明确。本研究利用新兴的三维成像技术探究HPM是否顺利获得抑制血管生成来延缓CAC进展。

方法：采用氮氧甲烷（AOM）/ 葡聚糖硫酸钠（DSS）制备CAC模型。将大鼠随机分为正常组、模型组和HPM组。观察成瘤大鼠数、肿瘤数量、肿瘤直径。采用免疫组织化学或酶联免疫吸附法（ELISA）检测微血管密度（MVD）、活性氧（ROS）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、血管内皮生长因子受体1（VEGFR1）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。采用具有超强荧光保存能力的溶剂清除器官三维成像（FDISCO）组织透明化技术使结肠组织透明化，并用血小板内皮细胞粘附分子1（PECAM-1）对血小板内皮细胞进行染色和标记。使用Imaris软件对结肠血管结构进行三维测量和分析。

结果：与模型组相比，HPM组结肠组织中肿瘤直径、MVD、ROS、HIF-1α、VEGFA、VEGFR1、IL-6、IL-1β、TNF-α含量均明显降低。3D成像显示，HPM组血管数量、血管分支点数量、血管分支等级均低于模型组。血管分支点数和血管分支等级与血管平均长度呈负相关。

结论：HPM具有抑制CAC血管生成的作用。本研究顺利获得FDISCO组织透明化技术进行3D成像，可能在血管结构的宏观水平上为HPM抑制CAC的进展给予新的证据。

关键词：结肠炎相关性结肠癌，隔药灸，组织透明化技术，三维可视化，血管结构