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已发表论文
ATM 激酶依赖性的 Chk2 磷酸化在 CpG ODN7909 增强 A549 细胞放射敏感性中的作用研究
Authors Liu XQ, Liu XD, Qiao TK, Chen W, Yuan SJ
Published Date June 2015 Volume 2015:8 Pages 1399—1406
DOI http://dx.doi.org/10.2147/OTT.S80288
Received 4 January 2015, Accepted 6 May 2015, Published 10 June 2015
Approved for publication by Dr Faris Farassati
目的：本研究进一步探讨 ATM 激酶依赖性的 Chk2 磷酸化对 CpG ODN7909 增强人肺腺癌 A549 细胞放射敏感性的影响。
方法：体外培养的人肺腺癌 A549 随机分为对照组、CpG 组、X-ray 组、CpG+X-ray 组、ATM siRNA+CpG+X-ray 组（简称 ATM siRNA 组）和Chk2 siRNA+CpG+X-ray 组（简称 Chk2 siRNA 组）；采用特异性 siRNAs 分别对 ATM 和 Chk2 基因进行沉默；应用 Western blot 检测 ATM 激酶和 Chk2 激酶的表达及磷酸化；流式细胞仪分析细胞周期和凋亡情况；倒置相差显微镜下观察细胞集落形成，多靶单击模型拟合细胞存活曲线，分析放射增敏比。
结果：Western-blot 显示 ATM 激酶和 Chk2 激酶的表达在对照组、CpG 组、X-ray 组和 CpG+X-ray 组之间是基本相同的；在对照组和 CpG 组中，ATM 激酶和 Chk2 激酶的磷酸化几乎未检测到，然而 X-ray 组和 CpG+X-ray 组中，ATM 激酶和 Chk2 激酶的磷酸化水平增加，尤其 CpG+X-ray 组增加明显，两组之间差异有统计学意义（t =6.00, P <0.01；t =3.13, P <0.05）；ATM siRNA 组和 Chk2 siRNA 组中，ATM 激酶和 Chk2 激酶的表达明显下调，而且同 CpG+X-ray 组相比，ATM siRNA 组中 ATM 激酶和 Chk2 激酶的磷酸化水平以及 Chk2 siRNA 组中 Chk2 激酶的磷酸化水平均明显降低 (t =14.35, P <0.01；t =8.46, P <0.01；t =7.28, P <0.01)；流式细胞仪分析显示 A549 细胞凋亡率及G2/M 期细胞数量在 CpG+X-ray 组中均明显增加，同其他组相比差异均有统计学意义 (所有 P 值均 <0.05)；多靶单击模型显示 CpG+X-ray 组的放射增敏比为 1.39，分别高于 ATM siRNA 组的 1.04 和 Chk2 siRNA 组的 1.03。
结论：本研究结果显示 CpG ODN7909 能够顺利获得增加 ATM 激酶依赖性的 Chk2 磷酸化而增强人肺腺癌 A549 细胞放射敏感性，暗示 ATM/Chk2 信号通路的活化可能涉及这一增敏过程。尽管如此，ATM 激酶具体的活化机制值得进一步探讨。
Keywords: ATM kinase, ODN, signal pathway, cell cycle, apoptosis, radiosensitivity
方法：体外培养的人肺腺癌 A549 随机分为对照组、CpG 组、X-ray 组、CpG+X-ray 组、ATM siRNA+CpG+X-ray 组（简称 ATM siRNA 组）和Chk2 siRNA+CpG+X-ray 组（简称 Chk2 siRNA 组）；采用特异性 siRNAs 分别对 ATM 和 Chk2 基因进行沉默；应用 Western blot 检测 ATM 激酶和 Chk2 激酶的表达及磷酸化；流式细胞仪分析细胞周期和凋亡情况；倒置相差显微镜下观察细胞集落形成，多靶单击模型拟合细胞存活曲线，分析放射增敏比。
结果：Western-blot 显示 ATM 激酶和 Chk2 激酶的表达在对照组、CpG 组、X-ray 组和 CpG+X-ray 组之间是基本相同的；在对照组和 CpG 组中，ATM 激酶和 Chk2 激酶的磷酸化几乎未检测到，然而 X-ray 组和 CpG+X-ray 组中，ATM 激酶和 Chk2 激酶的磷酸化水平增加，尤其 CpG+X-ray 组增加明显，两组之间差异有统计学意义（t =6.00, P <0.01；t =3.13, P <0.05）；ATM siRNA 组和 Chk2 siRNA 组中，ATM 激酶和 Chk2 激酶的表达明显下调，而且同 CpG+X-ray 组相比，ATM siRNA 组中 ATM 激酶和 Chk2 激酶的磷酸化水平以及 Chk2 siRNA 组中 Chk2 激酶的磷酸化水平均明显降低 (t =14.35, P <0.01；t =8.46, P <0.01；t =7.28, P <0.01)；流式细胞仪分析显示 A549 细胞凋亡率及G2/M 期细胞数量在 CpG+X-ray 组中均明显增加，同其他组相比差异均有统计学意义 (所有 P 值均 <0.05)；多靶单击模型显示 CpG+X-ray 组的放射增敏比为 1.39，分别高于 ATM siRNA 组的 1.04 和 Chk2 siRNA 组的 1.03。
结论：本研究结果显示 CpG ODN7909 能够顺利获得增加 ATM 激酶依赖性的 Chk2 磷酸化而增强人肺腺癌 A549 细胞放射敏感性，暗示 ATM/Chk2 信号通路的活化可能涉及这一增敏过程。尽管如此，ATM 激酶具体的活化机制值得进一步探讨。
Keywords: ATM kinase, ODN, signal pathway, cell cycle, apoptosis, radiosensitivity
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